ctab法提取细菌dna详细步骤—ctab法提取真菌dna的原理

CTAB法，即CTAB-酚-氯仿法，是一种常用的DNA提取方法，适用于细菌、真菌等多种微生物的DNA提取。以下是CTAB法提取细菌DNA的详细步骤：

1. 样品准备

- 取适量的细菌样品，可以是纯培养物或临床样本。

- 将样品加入适量的无菌生理盐水中，轻轻振荡混匀。

- 8000g离心5分钟，弃去上清液，保留沉淀。

2. 细胞裂解

- 向沉淀中加入等体积的CTAB裂解缓冲液（含有CTAB、NaCl、Tris-HCl、EDTA等成分）。

- 65℃水浴30分钟，使细胞壁和细胞膜破裂，DNA释放到溶液中。

3. 去除蛋白质

- 加入等体积的酚-氯仿-异戊醇混合液（25:24:1），充分混匀。

- 12,000g离心10分钟，分离出含DNA的上层水相。

4. 纯化DNA

- 向上层水相中加入等体积的冰乙醇，混匀后放置-20℃冰箱中至少30分钟。

- 12,000g离心10分钟，弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀。

- 12,000g离心5分钟，弃去上清液，干燥DNA沉淀。

5. 溶解DNA

- 向DNA沉淀中加入适量的无菌去离子水，溶解DNA。

6. DNA定量

- 使用分光光度计测定DNA溶液的OD260/280值，计算DNA浓度。

7. DNA储存

- 将DNA溶液转移至无菌离心管中，加入适量的RNA酶抑制剂，储存于-20℃或-80℃冰箱中。

CTAB法提取真菌DNA的原理

CTAB法提取真菌DNA的原理主要基于以下几个步骤：

1. CTAB结合DNA

- CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，能够与DNA分子结合，形成稳定的复合物。

2. 细胞裂解

- CTAB裂解缓冲液中的NaCl和Tris-HCl能够破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物释放出来。

3. 去除蛋白质

- 酚-氯仿-异戊醇混合液能够破坏蛋白质的疏水相互作用，使蛋白质沉淀，从而去除蛋白质。

4. DNA纯化

- DNA与CTAB形成的复合物在乙醇中沉淀，而蛋白质和其他杂质则留在上清液中。

5. DNA溶解

- 通过加入去离子水，可以使DNA从CTAB复合物中解离出来，形成可溶解的DNA溶液。

CTAB法提取真菌DNA具有操作简便、效率高、DNA纯度好等优点，是实验室中常用的DNA提取方法之一。